Wprowadzanie toksyny cholery do spolaryzowanych ludzkich komórek nabłonka jelitowego. Identyfikacja wczesnego wrażliwego na brefeldynę zdarzenia wymaganego do generacji peptydu A1.

Wpływ frakfeliny-A (BFA), odwracalnego inhibitora transportu pęcherzykowego, na wydzielanie Cl- indukowane toksyną cholery (TK) (Isc) zbadano w spolaryzowanej linii komórkowej ludzkiego jelita, T84. Wstępne traktowanie monowarstw T84 z 5 mikroM BFA odwracalnie hamowało Isc w odpowiedzi na szczytowe lub podstawno-boczne dodanie 120 nM CT (2,4 +/- 0,5 vs. 68 +/- 3 mikroA / cm2, n = 5). Przeciwnie, BFA nie hamował odpowiedzi Isc na agonistę cAMP agonisty VIP (63 +/- 7 mikroA / cm2). BFA nie miało wpływu na wiązanie powierzchni komórki i endocytozę funkcjonalnego fluorescencyjnego analogu CT lub na zależność od dawki wywołanej przez CT indukcji TNF-NAD w Gs alfa in vitro. Przeciwnie, BFA całkowicie zahamowało (> 95%) zdolność komórek T84 do redukcji CT do enzymatycznie aktywnego peptydu A1. BFA musiano dodać w ciągu pierwszych 10 minut ekspozycji na CT, aby zahamować wywołany przez CT Isc. Wczesny etap wrażliwy na BFA nastąpił przed etapem wrażliwym na temperaturę, niezbędnym do wierzchołkowego działania CT. Badania te pokazują, że kolejne etapy są wymagane do biologicznej odpowiedzi na miejscowe CT: (a) wiązanie z powierzchniami komórek i szybką endocytozą; (b) wczesny, wrażliwy na BFA transport pęcherzykowy niezbędny do redukcji peptydu A1; i (c) kolejna wrażliwa na temperaturę translokacja sygnału (peptyd A1 lub ewentualnie ADP-ryboza-Gs alfa) do domeny podstawno-bocznej.
[podobne: dopinki do włosów allegro, jak można zarazić się ospą, ile kosztuje wazektomia ]